在细胞融合过程中，不仅两种类型的细胞融合，而且两个亲本细胞也相互融合。含有两个不同双亲的细胞称为异核生物或异核生物。来自同一亲本的细胞融合形成的细胞称为同核体或同核细胞。让莱德伯特（北京）生物科技有限公司来为您介绍一下融合细胞的筛选和克隆。

在PEG和仙台病毒的融合过程中，细胞融合是随机的。除了形成杂交细胞外，每一个母细胞都会自我融合，杂交细胞需要及时分离或筛选。

大多数多核细胞在一周内死亡，只有少数异核细胞，特别是双核异核细胞存活。两个不同亲本细胞的染色体通过有丝分裂融合成一个核物种，形成一个杂交细胞。

基于酶缺乏型、营养缺乏型、温度敏感性、形态和行为等标记建立了多种选择系统。最常用的方法是缺乏酶的hat选择性培养。

一、初步筛选

存活的hat细胞多为B细胞与骨髓瘤细胞融合形成的杂交瘤细胞。未融合的骨髓瘤和融合的骨髓瘤细胞由于DNA合成的抑制而在hat中死亡。未融合的B细胞和融合的B细胞在体外不能增殖时会逐渐死亡。

如果氨基蝶呤（a）阻断了核酸的正常代谢途径，次黄嘌呤（H）可通过次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶（HGPRT）肌苷酸对其进行催化，而胸苷（T）可通过胸苷激酶（TK）合成脱氧核苷酸。然而，骨髓瘤细胞缺乏TK和HGPRT酶，因此它们不能在A的存在下生长。正常细胞，如B细胞，通过补救途径继续生长。

骨髓瘤细胞和正常B细胞形成的杂交瘤可以在hat培养基中正常生长，因为正常细胞可以提供TK和HGPRT酶。

二、抗体特异性筛选

并非所有的B细胞都能产生实验所需的抗体，而且小鼠的许多原始B细胞系对常见疾病都有抵抗力。因此，筛选杂交瘤细胞产生的抗体特异性是制备单克隆抗体的关键步骤之一。

杂交瘤细胞的筛选方法有三种：二抗法、抗原结合法和功能筛选法。常用的方法有第二抗体法，包括固相放射免疫分析法（RIA）、酶联免疫吸附试验（ELISA）和荧光激活细胞分类法（FACS）。

三、细胞克隆

通过抗体特异性选择的细胞系可能仍然包含两组以上的细胞，因此需要单克隆细胞。杂交瘤细胞的克隆通常采用有限稀释法或软琼脂法。从单个细胞获得克隆。用ELISA法再次筛选特异性抗体，获得能产生特异性抗体的单克隆细胞系。

在获得稳定的抗体后，通常通过ELISA将抗体亚型鉴定为IgG、IgM或IgA。如果免疫期太短，则更容易获得IgM，但一般来说IgG仍然较多。

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