动物细胞融合最有价值的成果是利用杂交瘤技术生产单克隆抗体。英国科学家克莱尔和米尔斯坦合作,将适应体外培养的小鼠骨髓瘤细胞与羊红细胞免疫的小鼠脾细胞融合,发现融合后的杂交瘤细胞具有亲本细胞的特性。通过克隆,杂交细胞可以制成简单的细胞系。因此,可以获得具有相同结构和性质的单克隆抗体,即单克隆抗体。下面由莱德伯特(北京)生物科技有限公司为大家介绍一下动物细胞融合中的单克隆抗体。
Burnet提出了克隆选择理论:浆细胞只产生一种免疫球蛋白分子,然后单克隆细胞产生的抗体分子是单克隆的,单克隆抗体具有独特的同质结构,这一点已被各种实验所证实。
将肿瘤细胞与B细胞融合,培养成能产生单一抗体并在体外快速生长的杂交瘤细胞。杂交瘤细胞群是单克隆的,并不断分泌成称为单克隆抗体的特异性抗体。
骨髓瘤细胞和淋巴细胞的混合物中有三种细胞:两种非融合细胞和杂交瘤细胞。
一、亲本细胞的选择
1、骨髓瘤细胞:骨髓瘤细胞本身不分泌抗体(以确保杂交瘤细胞产生单克隆抗体);有无限分裂的能力;黄嘌呤或鸟嘌呤转磷酸肌醇酶缺陷或胸腺嘧啶核苷激酶缺陷在HAT培养基中不能存活和增殖。
2、B淋巴细胞:用特定抗原免疫后产生靶向抗体的淋巴细胞,免疫后的动物谱系与骨髓瘤细胞一致或接近。
二、培养基的选择(HAT培养基)
为了去除未融合的骨髓瘤细胞,在培养基中加入次黄嘌呤(H)、氨基蝶呤(A)和胸腺嘧啶脱氧核糖(T)。A阻断正常细胞的主要DNA合成途径(二氢叶酸到四氢叶酸),因此只有能够使用H和T的正常细胞才能通过旁路合成DNA而不死亡(脾脏细胞有最高分裂次数或不分裂,死亡)。
骨髓瘤细胞:不能通过旁路合成DNA,主要途径被A阻断,因此简单的肿瘤细胞很快死亡。
杂交瘤细胞:具有瘤细胞(无限期分裂的能力)和野生型淋巴细胞的特征,可以绕过DNA并长期存活,从而被分离出来。
目前,单克隆抗体是在生物反应器中通过悬浮培养产生的。不同的方法生产单克隆抗体的纯度不同。用于生物医学应用的单克隆抗体必须具有一定的纯度。目前Beacon这款仪器具备了单细胞光导系统通过整合光电定位技术和微流控技术,实现了在芯片的纳升级小室中,基于单个细胞的高通量细胞生物学研究,对单克隆抗体这方面有着重大的意义。